中国仓鼠 卵巢细胞（CHO-S）

中国仓鼠 卵巢细胞(CHO-S)
细胞介绍
贴壁生长及悬浮生长均可（用于蛋白表达时，应使用悬浮生长状态，此时细胞生长状态更好，比表面积更高，生物反应器中的传质、传热效率更高，同时也可提高生物反应器空间使用效率。工业上大规模生产单抗，重组蛋，大部分使用悬浮培养法来生产）
 
细胞特性
1  来源：中国仓鼠
2  形态 ：成纤维细胞样
3  含量：>1x10 6 个/mL
4  污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5  规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
 
运输和保存 ：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
 
中国仓鼠 卵巢细胞(CHO-S)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
一． 培养基 及 培养 冻存 条件准备：
1）培养基信息：EX-CELL CD-CHO CHO Serum-free Medium,ChemicallyDefined(Sigma-Aldrich)添加物：L- 谷氨酰胺（Sigma-Aldrich）Anti-Clumping Agent(Gibco)备注 ：CD-CHO CHO Serum-free Medium 请按照培养基配制说明书配制，L-谷氨酰胺配制浓度为 200mM，工作浓度为 8mM（即稀释 25 倍，如 500ml CHO Serum-freMedium 中添加 20ml 200mM L-谷氨酰胺，抗结团剂使用为 1%，即 500ml CHOSerum-free Medium 中添加 5ml 抗结团剂）
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养箱湿度为 70%-80%。
3）冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二． 细胞 处理 ：
传代、转染、建库及实验室规模小试方法：赛百慷（上海）生物技术股份有限公司提供的 CHO-S 细胞为已驯化的细胞，具有良好的适应悬浮生长及适应无血清培养基生长特性。
传代 方法：
1.10cm 皿中培养：使用计数器（计数器或者血球计数板计数）计数，接种密度为 3×10 5 个细胞/ml 接种于提前 37℃预热的新鲜培养基中（建议培养基取 7-8ml，此时细胞生长状态较好），置于摇床上生长，转速为 120-130rpm，湿度为 70-80%，5%二氧化碳，温度为 37℃。
2.培养约 2-3 天，细胞密度达到 1×10 6 个活细胞/ml 时，应 1000rpm，25℃离心5min，离心后计数（此时应稀释），然后接种密度为 3×10 5 个细胞/ml 接种于提前 37℃预热的新鲜培养基中。细胞数目足够时，可冻存。也可选择 125ml 或者 250ml 摇瓶中培养细胞。（注意细胞培养液体积一般在总体积的五分之一，如在 125ml 摇瓶中加入 25ml 培养物，应注意在摇瓶中培养细胞时应将瓶盖稍微拧松，以便于气体交换，同时也不宜拧得过松，防止细胞污染）
转染 方法：
在连续 5 代细胞密度未超过 2×10 6 个活细胞/ml 时，可以使用 FreeStyle Max 转染试剂（Gibco，货号：16447）在 CD CHO Serum-free Medium 中直接转染。（注
意：Anti-Clumping Agent 会干扰 FreeStyle Max 转染试剂转染效率，同时也会干扰其他脂质体型转染试剂的转染效率）
建库方法 ：
若需要建库，可将细胞接种于 125ml 摇瓶中（接种密度为 3×10 5 个细胞/ml，总体积为 25ml），此方法同样适用于稳定表达所需要蛋白的细胞株的建库工作。建库时，需要先建初级库（master bank）（一般为 10 支，每支细胞总数不少于 4.5×10 7 个细胞），此步骤结束后，从冻存的初级库中取出一支复苏，按照同样步骤建次级库（working bank）（相同的，一般为 10 支，每支细胞总数不少于 4.5×10 7个细胞）。实验室 规模小试方法：将挑选出的稳定细胞株从 96 孔板到 24 孔板到 6 孔板到 10cm 皿中逐级扩大培养后（此时需要注意在培养过程中应及时保种，以防止后续步骤出现污染，及应对可能的表达量衰退现象）以 3×10 5 个细胞/ml 接种于 125ml 摇瓶中，转速为120-130rpm，温度为 37℃，湿度为 70-80%，连续培养一周，每天取样做出相应的细胞生长曲线，细胞活率曲线，蛋白表达曲线，可根据实际情况，每天取样测出培养基中葡萄糖含量，以便决定是否要补加葡萄糖，同时可使用 CHO Feedioreactor Supplement 作为细胞发酵中补料，同时做出相应的细胞生长曲线，细胞活率曲线，蛋白表达曲线，为中试放大补料添加做出合理数据支持。
 
中国仓鼠 卵巢细胞(CHO-S)注意事项：
1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们电联。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。