中国仓鼠卵巢细胞（CTLA4 Ig-24）

中国仓鼠卵巢细胞(CTLA4 Ig-24)
细胞介绍
CHO 细胞以人 CTLA-4 基因细胞外结构域序列和人 IgCgamma1 的绞链区，CH2 和CH#区序列的融合结构转染，构建了这株细胞。它们表达融合蛋白(CTLA4Ig)。
 
细胞特性
1）来源：中国仓鼠卵巢
2）形态 ：可贴壁生长（上皮细胞样），也可悬浮生长（圆球形）
3）含量：>1x10 6 个/mL
4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装运输和保存：使用含有胎牛血清的 2ml 冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在 1000RPM，常温条件下，离心 5min 后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后至10cm 培养皿或者 T25 培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
 
中国仓鼠卵巢细胞(CTLA4 Ig-24)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
一． 培养基 及 培养 冻存 条件准备：
培养条件：贴壁生长时，选择 DMEM-H 培养基(DMEM-H:GIBCO,添加 NaHCO3 1.5g/L, 添加 0.2 mM 脯氨酸,0.001 mM 氨甲蝶呤)，90%；胎牛血清，10%。[MTX 是基因 DHFR 产物的抑制物。当培养基中存MTX 时，MTX 可渗入细胞内与 DHFR 蛋白结合，使核苷酸的合成受阻。但是 DHFR 基因连同其附近几千 KB的 DNA 还会扩增以满足核苷酸合成的需要。理论上 MTX 浓度越大，DHFR 基因扩增越多，与 DHFR 基因连锁的目的蛋白基因也表达得越多]悬浮培养时，请使用悬浮生长培养基，培养基为：EX-CELL CD-CHO CHOSerum-free Medium,Chemically Defined(Sigma-Aldrich)添加物：L- 谷氨酰胺（Sigma-Aldrich）Anti-Clumping Agent(Gibco)备注 ：CD-CHO CHO Serum-free Medium 请按照培养基配制说明书配制，L-谷氨酰胺配制浓度为 200mM，工作浓度为 8mM（即稀释 25 倍，如 500ml CHOSerumfreeMedium中添加 20ml 200mM L-谷氨酰胺，抗结团剂使用为 1%，即 500ml CHOSerum-free Medium 中添加 5ml 抗结团剂）
1）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养箱湿度为 70%-80%。
2）冻存液：90%*培养基（贴壁生长冻存时）或 90%悬浮培养基（悬浮生时），10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二． 细胞 处理 ：
1） 复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按 1：2 到 1：3 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约 1ml 含血清的培养基后加入冻存管中，再添加 10%DMSO 后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM 条件下离心 4 分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入 10%DMSO 后进行冻存。
 
中国仓鼠卵巢细胞(CTLA4 Ig-24)注意事项：
1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们电联。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。