人主动脉血管平滑肌细胞 （HA-VSMC）

人主动脉血管平滑肌细胞 (HA-VSMC)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 F-12K 培养基（F-12K: GIBCO，添加 0.05 mg/ml 抗 坏血酸，0_01 mg/m丨胰岛素，0.01 mg/ml转铁蛋白，1，0.03 mg/ml ECGS，10 mM HEPES，10 mM TES，1%P/S;北美胎牛血清(United States, GIBCO)，10%。

2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度 为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管迅速放入37°C水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心 管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入lmL培 养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。 第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人主动脉血管平滑肌细胞 (HA-VSMC)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部 分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的 培养基终止消化。轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入lmL培养液后吹匀。移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。
 
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配到冻存管 中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们电联。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护， 
细胞特性：
1)来源：血管平滑肌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人主动脉血管平滑肌细胞 (HA-VSMC)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的*培养基。
5.接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得电联。
细胞用途：仅供使用。