人脐静脉融合细胞（EA.hy926）

人脐静脉融合细胞(EA.hy926)
细胞介绍：
在PEG胁迫下，将原代培养的人脐静脉细胞与抗硫鸟嘌呤的A549克隆株融合， 构建了人脐静脉细胞株,EA.hy926。融合子在HAT培养基上生长并以八因子相关抗原筛选。EA.hy926己经过100次以上的群体倍增(PDLs)。电镜照片显示 Weibel-Palade小体的细胞质分布以及组织特异性的细胞器，分化的内皮细胞特性 如血管，体内平衡/血栓形成，血压及炎症反应。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM-H 培养基(DMEM-H，GIBCO添加 NaHC031.5g/L)， 90%;胎牛血清，10%。（DMEM 液体培养基：GIBCO)。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人脐静脉融合细胞(EA.hy926)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约lml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们电联。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：静脉内皮细胞与A549细胞株融合
2)形态：梭形，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装

人脐静脉融合细胞(EA.hy926)运输和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。