小鼠胚胎细胞（NIH/3T3）

小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)
细胞介绍
与原始的随机交配3T3和近交系BALB/c 3T3建株方法一样，NIH/3T3，是从MH Swiss小鼠胚胎培养物中建立的高度接触抑制的连续细胞株。为了培育在形态学 特征上更适合于进行转化分析的亚株，建立的MH/3T3细胞株又进行了五轮以上亚克隆。这株细胞对DNA转化及转染研究十分有用。检测表明肢骨发育畸形病 毒(鼠痘)阴性。
 
细胞特性
1)来源：胚胎
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备DMEM培养基(DMEM，GIBCO)，北美胎牛血清，15%，1% PS。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1.复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中 培养，补加培养基至6ml。
2.细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
力口 lm丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2ml*培养基终止消化。
轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加l-2mL 培养液后吹匀。
将细胞悬液按1:2到1:5比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml*培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为 10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配到冻存管中，注意冻存 管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
 
小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们电联。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。