人肝癌细胞（BEL-7402）

人肝癌细胞(BEL-7402)
细胞介绍：
BEL-7402细胞株是1974年从临床肝癌手术标本中建立的。细胞群体倍增时间为20小时。移植到处理过的wistar大鼠中的能形成肿瘤结节。细胞形态呈上皮样细胞。在电子显微镜下亦显示上皮细胞所具有的桥粒和张力原纤维，与临床肝癌 细胞相似。分瓶培养第四天时，其有丝分裂指数约为7%。BEL-7402细胞的染色 体数为不足三倍体，有一个异常的近端着丝点染色体。间接免疫荧光法测 BEL-7402细胞内的AFP为阳性反应。LDH同工酶谱显示与成年人肝细胞不同，而与人胚肝及临床肝癌相近。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO,90%;北美胎牛 血清(United States，GIBCO，，10%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞(BEL-7402)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部 分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约lml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们电联。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肝癌细胞(BEL-7402)运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；（2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。