ES-Ab ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

名  称：ES-Ab ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

规  格：96T/48T

说明书：48孔配置一份/96孔配置一份

用  途：仅供使用

服  务：多年代测服务，质量保证

品　牌：酶联生物

操作步骤：

1．取出试剂盒，室温（20-25℃）放置30分钟。

2．分组：取出96孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理，分别设标准品组（6个浓度）、空白孔、待测样品组。

注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。

3．加样：依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中，空白对照孔加入50ul的蒸馏水；其余微孔中加入50ul的待测样本。

4．加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入100ul的酶标溶液（空白对照孔除外）。

5．温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。

6．洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置15-30s，充分清洗酶标板5次，用吸水纸*拍干。

7．显色：各孔加入显色剂A液50ul后，再加入显色剂B液50ul。

8．终止：25-37℃下避光反应10-15分钟，加入50ul终止液。

9．读板：在450nm波长读取各孔的OD值。

实验规则：

1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%，可用水和电子天平进行确定，但有专业人员进行矫正。

2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支，吸取不同的液体后，要更换枪头，即使是吸取标准品时。

3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。

4、实验时，要使底物避光保存。

5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。

6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。

8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体，也可以用酶标仪的晃动功能。

9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加*，没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液，加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

12、底物是光敏感的，要在临用前现配。

13、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。

14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。

15、待检样品要澄清，否则会影响结果。

16、温浴时间应遵守试剂盒规定。

17、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。

18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。

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