一、实验目的

植物细胞和组织培养的技术性强，要求无菌操作，通过本实验可初步掌握常规的组织培养技术，加深对无菌操作的了解。

二、实验原理

植物的性：植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力，称为植物的性。

植物组织培养就是利用植物的性进行离体无菌植物培养的一门技术。植物组织培养按其原始意义，就是指愈伤组织培养。但发展至今，其范围日益扩大，已包括植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离体无菌培养。因此，拥有几种不同水平的培养技术，即整体的、器官的、组织的、细胞的和原生质的培养技术。

本实验选择豌豆为材料，豌豆(Pisumsativum)属豆科植物，是粮食、饲料和重要的蔬菜作物，也是遗传学家和植物生理学家感兴趣和乐于采用的实验植物，豌豆的根、茎、子叶、下胚轴、上胚轴、花芽等外植体，皆可形成愈伤组织，其中茎尖、幼胚、幼叶等器官可成功的再生成植株。茎尖培养可包括小至十几微米的茎尖分生组织(生长点)和大至几十毫米的茎尖或更大的芽培养。在实践应用上，常采用生长点的培养使患病植物去病毒，以达到挽救优良品种，提高产量和质量之目的。

三、实验材料

仪器设备：

1. 酒精灯、三角烧瓶，培养皿。

2. 镊子、剪刀、剖针。

3. 双筒解剖显微镜。

4. 光照培养箱或温室。

5. 材料烟草无菌苗、豌豆幼苗。

试剂：

1. MS培养基，植物激素：NAA、6-BA等。

2. 饱和漂液(次氯酸钠)。

3. 70%酒精、100%酒精、酒精棉球。

4. 无菌水。

四、实验步骤

豌豆苗的茎尖培养：

1、取发芽6天的豌豆幼苗10株，简取1厘米左右的茎尖，浸入70%的酒精中1分钟，再浸入饱和次氯酸钠溶液中消毒15分钟，(此步以后要求无菌)用无菌水中冲洗5次，在灭菌的滤纸上吸干水分，放入灭菌的培养皿中。

2、在双目解剖镜下，用灭菌的解剖针剥去幼叶露出生长锥，用灭菌的解剖针挑取带着两至三个叶原基的生长锥。

3、将挑好的茎尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L6-苄基腺嘌呤(6-BA)的培养基上诱导愈伤组织形成，用封口膜将培养皿封好。

4、在恒温培养箱中，26℃下,培养六周，形成愈伤组织，经继代后，可用于生根培养。