你们细胞是怎么冻存的?求解!!!我的是4度冰箱放半小时,-20度冰箱半小时,然后转移到-80度冰箱!但是放在-80度冰箱1个月后,细胞复苏就感觉状态不太好了!!

做实验前要先学会冻存，以备自己在后面的实验中能保持同一来源、稳定可靠的细胞，且可减少污染或其它不利影响。

影响冻存细胞活性的因素

1、细胞冻存保护剂：常用的有二甲基亚砜（DMSO）和甘油，常用的浓度为5%-10%（90%小牛血清）。DMSO对二倍体细胞的毒性较甘油小。

2、细胞悬液的冻结速度：慢冻时冰冻在细胞外形成，因此不致损害细胞。多数细胞以每分钟下降1℃的速度，降至-20℃冻结。均可获得满意效果。

3、保存温度：液氮罐，可达到-196℃，此时所有的物理化学活动均降至zui低限度，以保证细胞长期保存。

4、复苏：急速融化复苏可防止损害细胞。冻结细胞从液氮中取出后，应立即放入37℃~43℃的水浴中，30秒至一分钟内融化。