细胞培育技能又叫细胞克隆技能。细胞培育技能指的是细胞在体外条件下的成长,在培育的进程中细胞不再构成安排(动物),今天的文章中跟我们介绍一些关于细胞培育的基础知识!
一、细胞培育的基本概念
体外培育(in vitro culture)包括所有结构层次的培育,即:安排培育(tissue culture)、细胞培育(cell culture)和器官培育(organ culture)。
细胞培育(Cell culture)指从生物机体取出部分安排涣散成单个细胞或直接从机体取出单个细胞,也可把体外培育细胞涣散成单个细胞在体外条件下培育,细胞能继续存活与增殖。
二、细胞培育意图与用处
1、科学研讨
(1)药物研讨开发,如新药挑选,疫苗、基因工程药物、细胞工程药物研讨与开发、单克隆抗体制备等。
(2)基础研讨,如药物效果机理、基因功能、疾病产生机理等研讨。
2、生物制药
(1)疫苗出产:如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等),多肽疫苗(肿瘤疫苗)等。
(2)基因工程药物出产:如EPO等。
(3)抗体药物、基因治疗药物出产。
(4)细胞工程药物出产:生物细胞内的一些生物活性多肽,生物活性物质等。
(5)使用细胞法体外测定生物活性物质的活性;并预测其在体内的药效和代替体内法检测其成品的生物活性。
三 、原代培育和传代培育
原代培育(primary culture):将动物机体的各种安排从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械办法处理,涣散成单细胞,置适宜的培育基中培育,使细胞得以生计、成长和繁衍,这一进程称原代培育。
但实际上,通常把第依代至第十代以内的培育细胞统称为原代细胞培育。
传代培育(subculture):细胞在培育器皿中成长必定时刻后,被分开接种到新的培育器皿中。
当原代培育成功今后,跟着培育时刻的延长和细胞不断割裂,一则细胞之间互相触摸而产生触摸性按捺,成长速度减慢甚至中止;另一方面也会因营养物不足和代谢物堆集而不利于成长或产生中毒。此时就需要将培育物分割成小的部分,重新接种到别的的培育器皿(瓶)内,再进行培育。
对单层培育而言,80%集合或刚集合的细胞是较理想的传代阶段。
四、体外培育细胞的方法
集体培育(mass culture),将含有必定数量细胞的悬液置于培育瓶中,让细胞贴壁成长,集合(confluence)后构成均匀的单细胞层;
克隆培育(clonal culture),将高度稀释的游离细胞悬液加入培育瓶中,各个细胞贴壁后,互相间隔较远,经过成长增殖每一个细胞构成一个细胞集落,称为克隆(clone)。一个细胞克隆中的所有细胞均来源于同一个祖先细胞。