1. 紫外消du30min后封闭紫外灯，敞开超净台正常作业状况，用酒精消du操作者的双手。

2. 将所需的培育基，胰酶确保瓶身洁净后放于作业台面内，点燃酒精灯，将培育基和胰酶瓶口用酒精棉球擦洗后，再将瓶口对准在酒精灯上消du2-3次，旋开瓶盖后再次分别消du瓶口和瓶盖，分别放于酒精灯的两侧。特别是将培育基瓶放于斜架上，瓶口对准酒精灯，且放在间隔酒精灯zui近的位置，瓶盖置于酒精灯的另一侧。

3. 将培育瓶瓶口在酒精灯上消du2-3次，旋开后分别再次消du瓶口和瓶盖2-3次，盖放于酒精灯右侧后将培育瓶内的培育液悬空倒进污缸，在酒精灯消du2-3次瓶口，竖直放好。取1ml移液器快速移动在酒精灯上消du1-2次，然后再装上枪头汲取1.5ml胰酶液，悬空移入培育瓶内。

4. 将培育使胰酶浸没整个瓶壁的细胞层，计时约40s，立马竖起对着灯火可观察到细胞与细胞之间有zhen孔样缝隙，并有1-2个细胞掉落，这时为胰酶消化的zui适时机。若看到成片的细胞从瓶壁掉落为胰酶消化过度；若看不到zhen孔样缝隙和细胞掉落，则需持续消化，悄悄的敏捷平放培育瓶使胰酶浸没细胞层1s后敏捷竖起对着灯火观察细胞状况，可反复几回，直至出现zhen孔样缝隙和1-2个细胞掉落的消化状况。用移液器将胰酶吸净。

5. 汲取1ml细胞冻存液于培育瓶内，并用移液器汲取少量的培育基轻柔的反复冲洗培育瓶壁5-8次，使贴壁细胞*掉落于培育基内再悄悄吹打2-3次，使细胞尽可能处于单个悬浮状况。

6. 将1ml含有细胞的冻存液移入新的保种管内，拧紧瓶盖，做好试验符号。

7. 将培育基瓶口和瓶盖消du2-3次后拧紧，平息酒精灯，整理试验台面，取出试验试剂及污缸等，封闭超净作业台。

8. 将保种管先放于4℃冰箱 30min后拿出放置-20℃冰箱过夜，次日再放于-80℃的冰箱内3-4天，zui后存放于-196℃的液氮灌内长时间保存。

    
注此进程也可简化因实际操作进程中经历所得：步骤7结束后将保种管用干脱脂棉包裹后胶带封好直接放于-80℃冰箱内4-5天，即可放于液氮灌保存。但-80℃冰箱也可保存细胞株2-3月。