当抗原材料中的干扰物质不易除掉，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞赛与固相抗原结合。

标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反响呈色浅于阴性反响。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可选用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后参加抗原，构成固相抗原。

洗刷除掉抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞赛结合反响。竞赛法测抗体有多种形式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞赛结合，抗HBc 。

ELISA一般选用此法。另一种形式为将标本与抗原一起参加到固相抗体中进行竞赛结合，洗刷后再参加酶标抗体，与结合在固相上的抗原反响。抗HBe的检测一般选用此法。 
 
小分子抗原或半抗原因缺少可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，能够选用竞赛法形式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞赛与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，终的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。